Untersuchungen am Metall-Enzym-Komplex
Der Zinkgehalt der Nuclease S1 wurde nach zwei verschiedenen Methoden bestimmt: 1. durch eine polarographische Messung von freien Zinkionen mit einer Quecksilbertropfelektrode nach Veraschen des Proteinanteils durch konzentrierte Schwefelsäure, 2. durch
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FORSCHUNGSBERICHT DES LANDES NORDRHEIN-WESTFALEN Nr. 3085 / Fachgruppe Physik/Chemie/Biologie
Herausgegeben vom Minister für Wissenschaft und Forschung
Dipl. -Chem. Wigbert Berg Prof. Dr. Dr. Herbert Witzel Institut für Biochemie der Universität Münster
Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus der Endonuclease s1 aus Aspergillus oryzae
Springer Fachmedien Wiesbaden GmbH 1981
CIP-Kurztitelaufnahme der Deutschen Bibliothek Berg, Wigbert: Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus der Endonuclease s 1 [s) aus Aspergillus oryzae Wigbert Berg ; Herbert Witzel. - Opladen : Westdeutscher Verlag, 1981, (Forschungsberichte des Landes NordrheinWestfalen ; Nr. J085 : Fachgruppe Physik, Chemie, Biologie) ISBN 978-3-663-19927-4 NE: Witzel, Herbert:; Nordrhein-Westfalen: Forschungsberichte des Landes •••
© 1981 by Springer Fachmedien Wiesbaden Ursprünglich erschienen bei Westdeutscher Verlag GmbH, Opladen 1981
Herstellung: Westdeutscher Verlag GmbH ISBN 978-3-663-19927-4 DOI 10.1007/978-3-663-20271-4
ISBN 978-3-663-20271-4 (eBook)
- III -
Inhalt
l.
Einleitung
1
2.
Isolierung
3
3.
Charakterisierung der Nuclease S 1
5
3 .l.
Untersuchung zur Reinheit des isolierten Enzyms
5
3. 2.
Molekülmassenbestimmung
5
3. 3.
Stabilität der Nuclease S 1
3.4.
Isoelektrischer Punkt
4.
Untersuchungen am Metall-Enzym-Komplex
4.1.
Zinknachweis
4.2.
Versuche zur Desaktivierung der Nuclease S 1 durch Komplexbildner und ReaktiviPrung mit Zn 2 +
4.3.
Stabilität der Apo-Nueiease S 1
6
4.4.
Austauschversuche von Zn 2 + gegen andere Metallkationen
7
4. 5.
Modifizierungsreaktionen
8
4.5.1.
Modifizierung von Histidin
8
4.5.2.
Modifizierung von Carboxylat-Gruppen
9
4.5.3.
Modifizierung von Amino-Gruppen
10
4.5.4.
Modifizierung von Tyrosin
10
4.5.5.
Modifizierung von SH-Gruppen
10
4.5.6.
Modifizierung von Guanidinium-Gruppen
l l
5.
Substratspezifität
11
6.
Diskussion und VorstPllung zum Mechanismus der Katalyse
14
Abbildungsanhang
19
Literaturverzeichnis
23
5
6
- IV Abkürzungsverzeichnis
A
Adenosin
Ade Akt.
Adenin Aktivität
AS bispNPP
Ammoniumsulfat Bis-p-Nitrophenylphosphat
c
Cytidin 1-Cyclohexyl-3-(morpholinyl-ethyl)carbodiimid
CMC d d
DEAM
Tage Desoxy
DNA
Diethylaminomethylen Desoxyribonucleinsäure
EDC EDTA
1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid Ethylendiamin-tetraessigsäre
min NPT
Extinktion bei 280 nm Erdbeschleunigung Guanos in Guanin Stunden Michaelis-Konstante relative Molekülmasse Minuten 5 1 -Thymidylsäure-p-nitrophenylester
aNP
1-Naphthylphosphat
pl
Isoelektrischer Punkt
p
Phosphat Ribonucleinsäure
g G
Gua h
K m M r
RNA SOS T TPN Tris u
u wsc >
Natrium-dodecylsulfat Thymidin 3'-Thymidylsäure-p-nitrophenylester Tris-(Hydroxymethyl)aminomethan Uridin Enzymeinheit: 6E 260 •100/min (Einzelstrang-DNA) wasserlösliches Carbodiimid cyclisch
-
1 -
1. Einleitung Der erste Bericht über die Notwendigkeit von Zinkionen beim Wachstum von Aspergillus niger stammt von Raulin (1) aus dem Jahre 1869. Innerhalb eines Jahrzehnts wurde dann das Vorkommen von Zin
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